产品货号:
GS1404
中文名称:
一步法动物组织活性蛋白提取试剂盒
英文名称:
One-Step Animal Tissue Active Protein Extraction Kit
产品规格:
20T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒用于从动物组织中提取有活性的总蛋白,该试剂添加了一种温和的非离子型去污试剂,在匀浆或超声破碎时,该试剂高效提取的蛋白质可以最大限度的保持活性,可以用于1D,2D电泳,免疫共沉淀,Pull down,EMSA,报告基因分析(Luciferase、β-galactosidase、Acetyltransferase等),蛋白质激酶分析(PKA、PKC、Tyrosine Kinase等),酶免分析(Western blot、ELISA、RIA等),蛋白质纯化等实验;含有的去污试剂可以透析去除。本制品可以使用20次,每次可以处理100mg动物组织。
- 整个实验过程只需要20min左右;
- 可以处理20×100mg的动物组织样品;
- 提取的蛋白质可以透析去除离子及去污试剂或将缓冲液替换为所需要的目的蛋白质的合适缓冲液;
- 提取的活性蛋白质保持非变性状态,可以直接用于于1D、2D电泳、免疫共沉淀、Pull down、EMSA、蛋白纯化和酶活分析等实验;
- 可以维持报告基因酶和蛋白质激酶的活性。
组分 | 规格 | 保存 |
抽提试剂 | 20mL | 2~8℃ |
蛋白酶抑制剂 | 25μL | -20℃ |
DTT | 25μL | |
PMSF | 250μL |
保存:按标签指示温度保存,有效期2年。
- 所有的试剂及器具均需预冷后使用,以保证蛋白质的完整性。
- 产品中的保存条件及有效期均以未开封情况下计算,为了防止产品与空气接触发生化学反应影响产品性能,将未使用完毕的组分按存储要求保存同时建议开封后的组分尽快使用完毕。
- 如实验需要,请在实验前向抽提试剂中加入1倍浓度的我司生产的磷酸酶抑制试剂(100×磷酸酶抑制剂复合物I或10×磷酸酶抑制剂复合物II或10×磷酸酶抑制剂复合物III),再进行动物组织活性蛋白质的提取。
- 如实验需要,可在提取试剂中加入终浓度为5mM的EDTA抑制金属离子对蛋白质的干扰。
- 对于提取的蛋白质,可以采用我司生产的改良型BCA蛋白浓度测定试剂盒(货号:GS1483)或抗干扰型蛋白浓度测定试剂盒(货号:GS1485)或改良型Lowry法蛋白浓度测定试剂盒(货号:GS1487)对提取样品中的蛋白质进行定量。
- 如果用于蛋白质质谱研究,请用我司生产的PAGE胶蛋白铜染试剂盒(货号:GS1532)或PAGE胶蛋白锌染试剂盒(货号:GS1534)或质谱用蛋白快速银染试剂盒(货号:GS1419)对胶上的蛋白质进行染色,这些染色方法对蛋白质没有修饰作用,所以对质谱图没有影响。对于一般的染色,可以采用无毒型蛋白快速染色试剂盒(货号:GS1479)或高灵敏考马斯亮蓝快速染色试剂盒(货号:GS1549)或通用型蛋白染色液(货号:GS2027)进行染色。
- 可以使用重力型去盐柱(货号:GS1466)脱盐或将缓冲液替换为所需要的目的蛋白质的合适缓冲液。
- 如果该提取液用于2D电泳,请将所提取的样品用5~10倍的2D样品溶解液,如:样品提取液I(2D电泳)/蛋白样品提取液II(2D电泳)/蛋白样品提取液III(2D电泳)/蛋白样品提取液IV(2D电泳)/蛋白样品提取液V(2D电泳)/蛋白样品提取液VI(2D电泳)进行稀释,再用于2D电泳。
- 使用后,请旋紧瓶盖防止溶液挥发和与空气中的物质发生化学反应。
- 本试剂盒只能够用于体外实验,不能够用于临床、治疗和动物体内实验等,由此产生的后果,概不承担责任。
- 将100mg组织剪切成小块,尽量去除脂肪组织和结缔组织等非目的组织,加入适量的预冷的1X PBS于4℃,700g(3000rpm)离心3min,弃掉上清,重复洗涤两次。
- 向以上洗涤后的组织中加入1mL预冷的抽提试剂(使用前向每1mL抽提试剂中加入1μL DTT,10μL PMSF,1μL蛋白酶抑制剂),置玻璃匀浆器冰上均质30~50次至组织完全成匀质状液体无明显组织小块。
- 最大速度涡旋振荡10sec,冰上放置20min,期间取出振荡3~5次,再于4℃,12830g(12000rpm)离心10min以沉淀组织或细胞碎片,转移上清为组织活性总蛋白部分,分装并保存于-80℃,用于下游实验。
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